CN. Nguyễn Thị Minh Phượng, IVFMD Tân Bình

Hiện nay, tinh trùng ở bệnh nhân vô tinh không do tắc (Non-obstructive azoospermia – NOA) được thu nhận chủ yếu bằng phương pháp TESE, tuy nhiên số lượng tinh trùng thu hồi lại rất ít. Mặc dù vậy, đây lại là nguồn tinh trùng quý giá cho bệnh nhân vô tinh. Sự thành công của chu kỳ hỗ trợ sinh sản bằng phương pháp tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI) sử dụng tinh trùng tinh trùng từ TESE rất khó dự đoán. Nếu thất bại đồng nghĩa với việc bệnh nhân phải thục hiện thủ thuật nhiều lần gây khó chịu và đau đớn, tăng nguy cơ viêm tinh hoàn, phá vỡ hàng rào máu-tinh hoàn, một số trường hợp cơ thể sản sinh kháng thể kháng tinh trùng gây ảnh hưởng tới bệnh nhân.
 
Sự ra đời của đông lạnh tinh trùng giúp hạn chế được nguy cơ từ việc bệnh nhân phải làm thủ thuật nhiều lần. Tuy nhiên, do tinh trùng chưa trưởng thành có màng tế bào và DNA chưa được hoàn thiện nên giảm tỷ lệ thu hồi khi thực hiện các phương pháp đông lạnh truyền thống. Để giải quyết vấn đề trên, một số vật chứa đã được phát triển như: màng zona rỗng, micro‐straw, ICSI needle, cryotop, cellsleeper, cryopiece. Tuy nhiên, hiệu quả vẫn chưa được tối ưu, cần phải phát triển dụng cụ được phát triển đặc biệt cho nhóm tinh trùng số lượng ít.
 
Trong nghiên cứu này, nhóm nghiên cứu lựa chọn động lạnh ống sinh tinh, phát triển dụng cụ đông lạnh cryopiece mới. Để đánh giá hiệu quả của vật chứa mới này, khả năng di động, tỷ lệ sống, mức độ phân mảnh DNA tinh trùng trước và sau đông lạnh đã được đánh giá.
 
Thiết kế nghiên cứu:
Dụng cụ trữ: Cryopiece mới bao gồm: một ống chứa (ống dùng trong đông lạnh tinh trùng thông thường, thể tích 1,8 ml), 5 lá polypropylene (không độc, dài 1 cm rộng 0,5 cm) được gắn mảnh xốp polyvinyl clorua (PVC) đánh dấu mẫu bằng chỉ vô trùng. Lá polypropylene có thể thiết kế độc lập bên ngoài phòng phôi học, khử trùng bằng phương pháp khử trùng bằng hơi nước áp suất cao (áp suất: 147 kpa, nhiệt độ: 121°C trong 20 phút).
 
Chuẩn bị mẫu: 40 mẫu mô tinh hoàn từ 35 bệnh nhân vô tinh do tắc (obstructive azoospermia – OA), 4 bệnh nhân vô tinh không do tắc (NOA) và một bệnh nhân giảm sinh tinh do tuổi cao tại bệnh viện Phụ sản và Nhi tỉnh Phúc Kiến, Trung Quốc. Tổng thể tích thu nhận của mẫu mô tinh hoàn dao động từ 4 đến 25 mm³, 35 mẫu từ bệnh nhân OA được sử dụng để thực hiện tiếp thí nghiệm. Mẫu sau khi thu nhận được chuyển vào các giọt môi trường G‐GAMETE™ 100 ul, rửa kỹ.
Quy trình thực hiện: Chia làm 2 phần

• Đông lạnh ống sinh tinh (G1): ống sinh tinh thu nhận sẽ được tiếp xúc với môi trường đông lạnh trong 15 phút ở nhiệt độ thường, sau đó được load lên lá polypropylene (thể tích dung dịch: 20ul và thể tích ống sinh tinh được bảo quản: 0,4 đến 2,5 mm3), sau đó mẫu được hạ nhiệt độ bằng cách cho tiếp xúc với hơi nitơ lỏng (cao hơn 4 cm so với mức nitơ lỏng, −120℃) trong 10 phút, cuối cùng chuyển lá polypropylene vào ống chứa (có sẵn nito), lưu trữ trong nito lỏng ít nhất 1 tuần.
• Phần còn lại sẽ được xé nhuyễn, ly tâm, thu 150 ul và huyền phù. Tiếp tục chia thành nhóm: đánh giá các thông số trước trữ của các mẫu, đông lạnh huyền phù tinh trùng thu được bằng Cryopiece mới (G2) và đông lạnh huyền phù tinh trùng bằng straw (G3)
• Mỗi nhóm (G1) và (G2) bao gồm 5 lá polypropylene.

  
Kết quả thu nhận được:

• Các chỉ số được đánh giá giữa nhóm G1 và G2 không có sự khác biệt
• Mức độ phân mảnh DNA tinh trùng thấp hơn ở nhóm G2 so với G3 (20,27 ± 5,40 so với 23,55 ± 6,02; p = 0,004).
• Tất cả mẫu thuộc nhóm G1 đều tìm thấy tinh trùng sau rã đông, tuy nhiên 2 mẫu ở nhóm G2 và 1 mẫu ở nhóm G3 lại không tìm thấy tinh trùng sau rã đông.

 
Vật chứa cryopiece mới mà nhóm nghiên cứu cho thấy phù hợp với việc trữ lạnh huyền phù tinh trùng và các trường hợp trữ lạnh các ống sinh tinh và dễ dàng sử dụng cho tất cả các trung tâm. Bên cạnh đó, việc chia nhỏ mẫu vào các lá polypropylene phù hợp cho việc sử dụng cho nhiều chu kỳ khác nhau, đây cũng là nghiên cứu đề xuất gắn các thẻ bọt giúp nhập biết các mẫu trong dụng cụ chứa. Một điểm đặc biệt của phương pháp này chính là thời gian rã đông mẫu nhanh chóng (ngắn hơn 5 phút so với straw). Việc lựa chọn đông lạnh ống sinh tinh cho thấy lợi ích, tinh trùng không bị thất thoát trong quá trình đông lạnh.
 
Tóm lại, thiết bị cryopiece mới này dễ thực hiện, có thể đông lạnh tinh trùng số lượng ít hoặc các ống sinh tinh, cải thiện việc sử dụng mẫu đặc biệt trong các trường hợp vô tinh do tắc.
 
Nguồn: Lin, F., & Zheng, B. (2022). Cryopreservation of human spermatozoa by freezing testicular seminiferous tubule with novel cryopiece. Andrologia, 54(3), e14356.

Từ khóa: Đông lạnh ống sinh tinh bằng thiết bị cryopiece