CNSH. Huỳnh Thu Thảo – IVFMD Phú Nhuận, Bệnh viện Mỹ Đức Phú Nhuận
 
Đông lạnh tinh trùng là kỹ thuật được sử dụng phổ biến trong hỗ trợ sinh sản với 3 kỹ thuật chính: đông lạnh chậm, đông lạnh nhanh và đông lạnh cực nhanh. Ở phương pháp đông lạnh thông thường, tinh dịch được tiếp xúc với chất bảo vệ đông lạnh (cryoprotectant agents – CPAs) thẩm thấu hoặc không thẩm thấu trước khi đông lạnh để hạn chế sự hình thành tinh thể đá nội bào và ngoại bào. Tuy nhiên, CPA thẩm thấu có thể gây ra chênh lệch áp suất thẩm thấu, làm co tế bào và gây tổn thương cơ học. Đồng thời sự thẩm thấu của CPA vào bên trong màng tế bào có thể làm thay đổi quá trình chuyển pha lipid, tăng quá trình peroxy hóa lipid, dẫn đến sự tổn thương màng tế bào và cấu trúc bộ khung xương tế bào.
 
CPA thẩm thấu như glycerol được sử dụng phổ biến trong đông lạnh tinh trùng bằng phương pháp thủy tinh hóa, nhưng việc bổ sung CPA thẩm thấu có những tác động xấu đến tinh trùng. Người ta nhận thấy CPA không thẩm thấu như HAS, sucrose, rafinose, và trahelose giúp khử nước và ổn định màng tế bào, ít gây tổn thương đến tinh trùng. Tuy nhiên, một số nghiên cứu cho thấy độ phân mảnh DNA và tổn thương chromatin ở nhóm thủy tinh hóa có sucrose cao hơn so với nhóm không sử dụng sucrose. Tinh trùng có kích thước nhỏ, chứa một lượng lớn protein và carbohydrate đóng vai trò như CPA giúp hạn chế sự hình thành tinh thể đá nội bào trong quá trình đông lạnh và rã đông. Thủy tinh hóa không có CPA sẽ không gây ra sự sốc thẩm thấu lên tế bào tinh trùng.
 
Nghiên cứu này nhằm đánh giá sự tác động của quá trình thủy tinh hóa không có CPA lên độ di động và sự phân mảnh DNA tinh trùng sau khi rã đông, các mẫu sẽ được thủy tinh hóa bằng ống mao dẫn thủy tinh kéo với thể tích nhỏ (10µl).
 
Phương pháp:
Nghiên cứu được thực hiện tại Trung tâm Nội tiết Sinh sản và Vô sinh Huế, Đại học Y Dược Huế, Việt Nam từ tháng 2 đến tháng 6 năm 2020, trên 50 mẫu tinh dịch. Tiêu chí nhận là mẫu tinh dịch có mật độ x10^6 ; đối với mẫu tinh trùng thủ thuật, xuất tinh ngược dòng, thể tích tinh dịch < 1 ml, thiểu tinh nghiêm trọng hoặc vô tinh sẽ bị loại khỏi nghiên cứu. 50 mẫu sau khi thực hiện swim-up, mỗi mẫu được chia thành 2 nhóm: nhóm 1 thực hiện thủy tinh hóa có CPA ( sử dụng môi trường SpermFreeze có chứa 12% glycerol), nhóm 2 thực hiện thủy tinh hóa không có CPA. Các mẫu được thủy tinh hóa và bảo quản trong các ống mao dẫn thủy tinh được kéo từ pipette Pasteur  (V=10µl). Nghiên cứu nhằm so sánh độ di động, tính toàn vẹn màng tế bào, độ phân mảnh DNA sau khi rã đông giữa 2 nhóm.
 
Kết quả nghiên cứu:

• Tỷ lệ di động tiến tới: ở nhóm thủy tinh hóa có CPA cao hơn đáng kể so với nhóm không có CPA ( 54,4 ± 11,09 > 51,14 ± 10,6, P = 0,027)
• Tính toàn vẹn của màng: cao và không có sự khác biệt giữa hai nhóm (71,34 ± 8,47 và 70,38 ± 8,11, P = 0,294)
• Tỷ lệ phân mảnh DNA (DFI): ở nhóm thủy tinh hóa có CPA cao hơn đáng kể so với nhóm không có CPA (14,2 ± 8,47 > 12,60 ± 9,03, P = 0,021)

Kết luận:
Dùng ống mao dẫn thủy tinh kéo để thủy tinh hóa tinh trùng mang lại hiệu quả cao. Thủy tinh hóa có CPA cho tỉ lệ tinh trùng di động tiến tới cao hơn và chỉ số phân mảnh DNA thấp hơn so với thủy tinh hóa không có CPA. Không có sự khác biệt nào về tính toàn vẹn màng tế bào giữa 2 nhóm sau khi rã đông.
 
Tài liệu tham khảo: Tam Le M, Van Nguyen T, Thanh Thi Nguyen T, Nhan Thi Dang H, Huy Vu Nguyen Q. Impact of cryoprotectant-free sperm vitrification in pulled-glass capillary on sperm parameters and DNA integrity: A lab trial study. Int J Reprod Biomed. 2024 Jun 12;22(4):305-316. doi: 10.18502/ijrm.v22i4.16391. PMID: 39035634; PMCID: PMC11255465.
 

Từ khóa: Chất bảo vệ đông lạnh; phân mảnh DNA; thể tích nhỏ; tinh trùng; thủy tinh hóa